Informacja

Drogi użytkowniku, aplikacja do prawidłowego działania wymaga obsługi JavaScript. Proszę włącz obsługę JavaScript w Twojej przeglądarce.

Wyszukujesz frazę "DNA polymerase" wg kryterium: Temat


Tytuł:
A comparison of PCR-based markers for the molecular identification of Sphagnum species of the section Acutifolia
Autorzy:
Sawicki, J.
Szczecinska, M.
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/57748.pdf
Data publikacji:
2011
Wydawca:
Polskie Towarzystwo Botaniczne
Tematy:
Acutifolia
random amplified polymorphic DNA
Sphagnum
genetic similarity
molecular identification
molecular marker
polymerase chain reaction
genetic relationship
species identification
peat moss
chloroplast
nuclear genome
Opis:
RAPDs, ISJs, ISSRs, ITS and katGs were applied to determine genetic relationships between common Sphagnum species of the section Acutifolia. Twenty populations were genotyped using ten ISJ primers, 12 pairs of katG primers, 10 ISSR and 10 RAPD primers, and a restriction analysis of ITS1 and ITS2. ISSR and katG markers revealed the greatest number of species-specific bands. An analysis of ITS1 and ITS2 regions with restriction enzymes also proved to be a highly effective tool for species identification.
Źródło:
Acta Societatis Botanicorum Poloniae; 2011, 80, 3
0001-6977
2083-9480
Pojawia się w:
Acta Societatis Botanicorum Poloniae
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
A simple method for extracting DNA from rhododendron plants infected with Phytophthora spp. for use in PCR
Autorzy:
Trzewik, A.
Nowak, K.J.
Orlikowska, T.
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/66480.pdf
Data publikacji:
2016
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
simple method
DNA extraction
rhododendron
leaf
plant infection
Phytophthora
polymerase chain reaction
detection
real-time PCR method
Opis:
Among the numerous protocols that describe the extraction of DNA, those relating to the isolation of DNA from infected plants, are rare. This study describes a rapid and reliable method of extracting a high quality and quantity of DNA from rhododendron leaves artificially infected with Phytophthora cactorum, P. cambivora, P. cinnamomi, P. citrophthora, and P. plurivora. The use of the modified Doyle and Doyle protocol (1987) allowed us to obtain high quantity and quality DNA (18.26 μg from 100 mg of the fresh weight of infected leaves at the ratios of A260/280 and A260/230 – 1.83 and 1.72, respectively), suitable for conventional polymerase chain reaction (PCR) and real-time PCR amplifications.
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 2016, 56, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Adaptor-mediated amplification of minute amounts of severely fragmented ancient nucleic acids
Autorzy:
Pusch, C M
Blin, N.
Broghammer, M.
Nicholson, G.J.
Scholz, M.
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/2042022.pdf
Data publikacji:
2001
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
mitochondrial DNA
genetics
nucleic acid
ancient DNA
polymerase chain reaction
DNA
cDNA
sex typing
Źródło:
Journal of Applied Genetics; 2000, 41, 4; 303-315
1234-1983
Pojawia się w:
Journal of Applied Genetics
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Application of DNA markers against illegal logging as a new tool for the Forest Guard Service
Autorzy:
Nowakowska, J.A.
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/38611.pdf
Data publikacji:
2011
Wydawca:
Instytut Badawczy Leśnictwa
Tematy:
application
DNA marker
DNA structure
wood
molecular identification
Forest Guard Service
tree species
determination
DNA profile
polymerase chain reaction
Opis:
DNA markers are currently the most precise tool for forest tree species identification and can be used for comparative analyses of plant material. Molecular diagnosis of evidence and reference material is based on comparing the structure of DNA markers duplicated in the PCR reaction and estimation of the DNA profiles obtained in studied wood samples. For this purpose, the microsatellite DNA markers are the most suitable tool because of their high polymorphism and accurate detection of structural changes in the genome. The analysis of tree stump DNA profiles let avoid timely collection of data such as tree age, diameter, height and thickness, although such a piece of information may advantageous in wood identification process. For each examined tree species, i.e. Pinus sylvestris L., Picea abies (L.) Karst., Quercus robur L. and Q. petraea (Matt.) Liebl., Fagus sylvatica L., Betula pendula L., and Alnus glutinosa L., wood identification was possible via the DNA profiles established on a basis of minimum 4 microsatellite nuclear DNA loci, and at least one cytoplasmatic (mitochondrial or chloroplast) DNA marker. Determination of the DNA profiles provided fast and reliable comparison of genetic similarity between material of evidence (wood, needles, leaves, seeds) and material of reference (tree stumps) in the forest. This was done with high probability (approximately 98– 99%).
Źródło:
Folia Forestalia Polonica. Series A . Forestry; 2011, 53, 2
0071-6677
Pojawia się w:
Folia Forestalia Polonica. Series A . Forestry
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Application of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (RFLP-PCR) in the analysis of single nucleotide polymorphisms (SNPs)
Autorzy:
Tarach, Piotr
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/1830648.pdf
Data publikacji:
2021-09-29
Wydawca:
Uniwersytet Łódzki. Wydawnictwo Uniwersytetu Łódzkiego
Tematy:
nucleotide polymorphisms
DNA analysis
polymerase chain reaction
Opis:
Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (RFLP-PCR) is a technique used to identify single nucleotide polymorphisms (SNPs) based on the recognition of restriction sites by restriction enzymes. RFLP-PCR is an easy-to-perform and inexpensive tool for initial analysis of SNPs potentially associated with some monogenic diseases, as well as in genotyping, genetic mapping, lineage screening, forensics and ancient DNA analysis. The RFLP-PCR method employs four steps: (1) isolation of genetic material and PCR; (2) restriction digestion of amplicons; (3) electrophoresis of digested fragments; and (4) visualisation. Despite its obsolescence and the presence of high-throughput DNA analysis techniques, it is still applied in the analysis of SNPs associated with disease entities and in the analysis of genetic variation of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). RFLP-PCR is a low-cost and low-throughput research method allowing for the analysis of SNPs in the absence of specialised equipment, and it is useful when there is a limited budget.
Źródło:
Acta Universitatis Lodziensis. Folia Biologica et Oecologica; 2021, 17; 48-53
1730-2366
2083-8484
Pojawia się w:
Acta Universitatis Lodziensis. Folia Biologica et Oecologica
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cacao swollen shoot virus detection and DNA barcoding of its vectors and putative vectors in Theobroma cacao L. by using polymerase chain reaction
Autorzy:
Obok, E.E.
Aikpokpodion, P.O.
Ani, O.C.
Allainguillaume, J.
Wetten, A.
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/2096411.pdf
Data publikacji:
2021
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
Cacao swollen shoot virus
COI – cytochrome c oxidase subunit I
DNA barcoding
Jack Beardsley
mealybug
PCR – polymerase chain reaction
Theobroma cacao
Opis:
Cacao swollen shoot virus (CSSV) is an endemic pathogen causing significant economic losses to cacao (Theobroma cacao L.) production in West Africa. There is limited updated report on the occurrence, spread, genetic diversity and species of CSSV and its mealybug vectors, especially in Nigeria. Nigeria is presently lagging behind in the search for resistance to CSSV and its vectors in T. cacao L. The present study aimed to map and screen for the presence of CSSV and its natural vectors – female mealybugs (Pseudococcidae: Hemiptera) in cacao plantations in Nigeria. Symptomatic and asymptomatic cacao leaves and whole female mealybug samples were collected from major cacao-growing areas in Nigeria – Abia, Akwa Ibom, Cross River, Edo, Ondo and Oyo States. A total of 2568 cacao leaves from 1052 cacao trees were screened with polymerase chain reaction (PCR) using an open reading frame 1 (ORF 1) CSSV-specific primer pair. PCR screening of the mealybug species was performed using the cytochrome c oxidase subunit I (COI) gene. A combination of scanning electron microscopy (SEM) and histology for morphological identification and DNA barcoding enabled to characterise the female mealybug species. The results revealed that CSSV and its mealybug vectors are present in the major cacao-growing areas in Nigeria. Although CSSV and its vectors have been previously reported in Cross River, Ondo and Oyo States, our results present the first documented evidence of CSSV emergence and its mealybug vectors in Abia, Akwa Ibom and Edo States. We also present the first report of Pseudococcus jackbeardsleyi (Gimpel and Miller) mealybug species on cacao in Nigeria. In conclusion, it is pertinent to re-establish coordinated routine survey and monitoring of CSSV and its mealybug vector presence in T. cacao L. in Nigeria.
Źródło:
BioTechnologia. Journal of Biotechnology Computational Biology and Bionanotechnology; 2021, 102, 3; 229-244
0860-7796
Pojawia się w:
BioTechnologia. Journal of Biotechnology Computational Biology and Bionanotechnology
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning and expression of the two DNA fragments of the I-18 C region of Chironomus tentans. II. The effects of the applied technology
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/66157.pdf
Data publikacji:
1998
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
promoter system
cloning
I-18 C gene
T7 RNA polymerase
Chironomus tentans
polymerase chain reaction
DNA fragment
Opis:
The chromosomal I-18 C region of Chironomus tentans contains the I-18 C gene. Two different open reading frames (i.e. the ORF I and II) of two different transcripts (i.e. the 1.8 kb and 4.6 kb RNA) of the I-18 C gene of Chironomus tentans were isolated, at the DNA level, by the Polymerase Chain Reaction, then were cloned into the bluescript vector and finally were cloned into the pET-3a vector in order to translate them in T7 RNA polymerase / promoter system of E. coli. It was possible to obtain the ORF I overexpressed. In a case of the ORF II the low molecular weight polypeptide was detected, however it was not overexpressed, but still this polypeptide was strongly visible on the SDS-polyacrylamide gel.
Region chromosomalny I-18 C Chironomus tentans zawiera gen I-18 C. Dwie odrębne otwarte ramy odczytu (tj. ORF I i II) genu I-18 C Chironomus tentans zostały wyizolowane, na poziomie DNA, przy użyciu Reakcji Łańcuchowej Polimerazy (PCR), a następnie zostały wklonowane do wektora blueskrypt i ostatecznie zostały wklonowane do wektora pET-3a w celu ich translacji w systemie promotora T7 RNA polimerazy w E. coli. Uzyskano bardzo dużą ekspresję ORF I. W przypadku ORF II wykryto obecność polipeptydu o niskiej masie cząsteczkowej i chociaż nie uzyskano jego bardzo dużej ekspresji, tym niemniej polipeptyd ten był silnie widoczny w żelu poliakryloamidowym z SDS.
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1998, 38, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning and expression of two DNA fregments of the I-18 C region of Chironomus tentans. I. The scheme of the performed experiments and the applied technology
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/65883.pdf
Data publikacji:
1998
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
promoter system
cloning
I-18 C gene
T7 RNA polymerase
Chironomus tentans
polymerase chain reaction
expression
pET vector
DNA fragment
Opis:
The I-18 C region of the polytenic chromosome of Chironomus tentans contains the I-18 C gene. Two DNA fragments, reflecting two different open reading frames (i.e.ORF I and II) of two different transcripts (i.e. 1.8 and 4.6 kb RNA) of the I-18 C gene were isolated, then were cloned into the intermediate vector and next to the final vector in order to translate them in T7 RNA polymerase / promoter system. The translation of the ORF I and II was performed to obtain the polypeptides of these ORFs for further study. Here, the scheme of the performed experiments and the applied technology that were necessary to realize the goal of this research, are presented.
Region i-18 C chromosomu politenicznego Chironomus tentans zawiera gen I-18 C. Dwa fragmenty DNA, odzwierciedlające dwie różne otwarte ramy odczytu (tj. ORF I i ORF II) dwóch różnych transkryptów (tj. 1.8 i 4.6 kpz RNA) genu I-18 C, zostały wyizolowane i następnie wklonowane do wektora pośredniego, a potem do wektora końcowego, w celu ich translacji w systemie promotora T7 RNA polimerazy. Translacja ORF I i ORF II była wykonana w celu uzyskania polipeptydów określonych przez te ORF do dalszych badań. W niniejszej pracy przedstawiono schemat wykonanych eksperymentów i zastosowaną technologię, która była potrzebna do zrealizowania celu badań.
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1998, 38, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. I. Preparation of the bacterial cells, transformation and isolation of the bluescript plasmid
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/66849.pdf
Data publikacji:
1999
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
transformation
promoter system
gene expression
cloning
I-18 C gene
isolation
T7 RNA polymerase
plasmid
Chironomus tentans
bacterial cell
polymerase chain reaction
DNA fragment
Opis:
The technology applied for the cloning of the open reading frame (ORF) I and II reflecting DNA fragments of the I-18 C gene of Chironomus tentans in regard to the preparation of the competent E. coli cells of the XL-1 strain needed for the transformation with the ligation reaction products, is presented. Also the transformation of these bacterial cells with the bluescript plasmid and its isolation for these cloning experiments, are described.
Opisano technologię, którą zastosowano do klonowania fragmentów DNA odzwierciedlających translacyjną otwartą ramę odczytu I i II genu I-18 C Chironomus tentans w zakresie: przygotowania kompetentnych komórek E. coli szczepu XL-1, poddawanych następnie transformacji produktami reakcji ligacji. Przedstawiono także zastosowaną technologię transformacji wymienionych komórek bakteryjnych przy użyciu plazmidu - blueskrypt oraz izolację tego plazmidu, w celu jego zastosowania w wymienionych eksperymentach klonowania.
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1999, 39, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. II. Preparation of the intermediate vector - bluescript plasmid for ligation with the inserts
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/66467.pdf
Data publikacji:
1999
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
cloning
I-18 C gene
plasmid
Chironomus tentans
polymerase chain reaction
DNA fragment
Opis:
The technology used for the cloning of the open reading frame (ORF) I and II reflecting DNA fragments of the I-18 C gene in regard to the preparation of the intermediate vector i.e. the bluescript for the ligation with the ORF I and II reflecting DNA fragments, is presented. The main steps include the Eco RV digestion of the bluescript plasmid, the phenol / methylene chloride extraction of the plasmid, dephosphorylation of the bluescript plasmid and finally its extraction with the phenol and ethanol precipitation.
Przedstawiono technologię, którą zastosowano do klonowania fragmentów DNA odzwierciedlających translacyjną otwartą ramę odczytu I i II genu I-18 C Chironomus tentans w zakresie: przygotowania wektora pośredniego - plazmidu blueskrypt do ligacji z wymienionymi sekwencjami wstawek. Główne etapy obejmują: trawienie plazmidu blueskrypt enzymem Eco RV, ekstrakcję plazmidu fenolem/ chlorkiem metylenu, defosforylację plazmidu blueskrypt, ostatecznie jego oczyszczenie poprzez ekstrakcję fenolową i precypitację etanolem.
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1999, 39, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. III. Preparation of the inserts for ligation with the bluescript and the modification of the vector
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/66473.pdf
Data publikacji:
1999
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
cloning
pET-3a vector expression
I-18 C gene
T7 RNA polymerase
Chironomus tentans
promotor system
polymerase chain reaction
bluescript vector
DNA fragment
Opis:
The technology applied for the cloning of the open reading frame (ORF) I and II reflecting DNA fragments of the I-18 C gene of Chironomus tentans in regard to the preparation of the inserts for ligation with the bluescript and the modification of this intermediate vector, is described. The ORF I reflecting DNA fragment prepared for ligation with the bluescript vector, had one end blunt (i.e. the 5’ end with the Nde I restriction site) and the second end was sticky (i.e. the 3’ end after the Bam HI digestion of this insert). Subsequently, the bluescript vector for this ligation had also one end blunt (i.e. the 5’ end with the Nde I restriction site) and the second end was sticky (i.e. the 3’ end after the Bam HI digestion). The ORF II reflecting DNA fragment prepared for the ligation had both ends blunt and so the vector.
Opisano technologię zastosowaną do klonowania fragmentów DNA, odzwierciedlających translacyjną otwartą ramę odczytu I i II genu I-18 C w zakresie przygotowania wstawek do ligacji z plazmidem blueskrypt i niezbędnych modyfikacji wektora pośredniego. Fragment DNA odzwierciedlający otwartą ramę odczytu (ORF) I przygotowano do ligacji z wektorem blueskrypt w ten sposób, że fragment ten posiadał jeden koniec tępy (tj. koniec 5’ z miejscem restrykcyjnym dla Nde I) i drugi koniec lepki (tj. koniec 3’ po trawieniu tej wstawki Bam HI). Także wektor blueskrypt, użyty do ligacji ze wspomnianą sekwencją wstawki, miał jeden koniec tępy (tj. koniec 5’ z miejscem restrykcyjnym dla Nde I) i drugi koniec lepki (tj. koniec 3’ po trawieniu Bam HI). Fragment DNA odzwierciedlający ORF II, przygotowany do ligacji z wektorem blueskrypt, miał oba końce tępe i stosownie do tego oba końce wektora były też tępe.
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1999, 39, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. IV. The ligation of the bluescript vector with the inserts
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/65392.pdf
Data publikacji:
1999
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
pET-3a vector
promoter system
cloning
I-18 C gene
T7 RNA polymerase
Chironomus tentans
polymerase chain reaction
expression
DNA fragment
Opis:
The technology used for the cloning of the open reading frame (ORF) I and II reflecting DNA fragments of the I-18 C gene in regard to the ligation reactions of the bluescript vector with the inserts, is presented. The main steps include: the calculation of the molar ratio of the bluescript plasmid to the ORF I and II reflecting DNA fragments as the inserts, the ligation reaction, the transformation of the E. coli cells of the XL- 1 strain with the ligation reactions products and growing of the transformed bacterial cells.
Przedstawiono technologię użytą do klonowania fragmentów DNA odzwierciedlających otwartą ramę odczytu I i II genu I-18 C Chironomus tentans w zakresie: reakcji ligacji wektora blueskrypt ze wstawkami sekwencji klonowanych wymienionych wyżej. Przedstawione główne etapy obejmują: obliczenie stosunku molarnego plazmidu blueskrypt do fragmentu DNA odzwierciedlającego otwartą ramę odczytu I i II. Fragmenty te zostały użyte jako wstawki. Przedstawiono także zastosowaną technologię dotyczącą reakcji ligacji, transformacji komórek bakteryjnych E. coli szczepu XL-1 produktami reakcji ligacji oraz hodowlę na płytkach agarowych stransformowanych komórek bakterii.
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1999, 39, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. V. Identification of the bacterial colonies, containing the recombinant bluescript plasmids
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/65003.pdf
Data publikacji:
1999
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
pET-3a vector
promoter system
cloning
I-18 C gene
T7 RNA polymerase
plasmid
Chironomus tentans
polymerase chain reaction
DNA fragment
identification
Opis:
The technology applied for the cloning of the open reading frame (ORF) I and II reflecting DNA fragments in regard to the identification of the bacterial colonies, of E. coli XL-1 strain, containing the recombinant bluescript plasmids, is described. The particular steps include: the α-complementation test, growing of the preliminary selected bacterial colonies in culture, isolation of the plasmids from these colonies, the Nde I and Bam HI digestion of the plamids mini-preparations, analysis of the digestion products and the identification of the bacterial colonies, containing the bluescript plasmids with the cloned inserts by the agarose gel electrophoresis (2% gel, 1 x TBE buffer).
Opisano technologię zastosowaną do klonowania fragmentów DNA odzwierciedlających otwartą ramę odczytu I i II genu I-18 C Chironomus tentans, w zakresie: identyfikacji kolonii bakteryjnych szczepu XL-1, zawierających zrekombinowane plazmidy blueskrypt. Poszczególne etapy obejmowały: test α-komplementacji, hodowlę wstępnie wybranych kolonii bakteryjnych, izolację plazmidów bakteryjnych poszczególnych kolonii z tych hodowli, trawienie mini-izolatów plazmidów Nde I i Bam HI, analizę produktów trawienia i identyfikację kolonii bakteryjnych, zawierających plazmidy blueskrypt z wklonowanymi wstawkami przy zastosowaniu elektroforezy w żelu agarozowym (2% żel, 1 x stężony bufor TBE).
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1999, 39, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. VI. The DNA sequencing of the cloned inserts
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/66720.pdf
Data publikacji:
1999
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
DNA sequence
pET-3a vector
promoter system
cloning
I-18 C gene
T7 RNA polymerase
Chironomus tentans
polymerase chain reaction
expression
DNA fragment
Opis:
The technology used for the cloning of the open reading frame (ORF) I and II reflecting DNA fragments in regard to the DNA sequencing of the cloned inserts, is presented. The object of the DNA sequencing of the cloned inserts, was to finally confirm and prove the sequence of the inserts as the sequence of the ORF I and II reflecting DNA fragments of the I-18 C gene of Chironomus tentans.
Przedstawiono technologię, zastosowaną do klonowania fragmentów DNA odzwierciedlających otwartą ramę odczytu I i II genu I-18 C Chironomus tentans w zakresie sekwencjonowania sklonowanych wstawek. Celem sekwencjonowania DNA sklonowanych wstawek było ostateczne potwierdzenie i udowodnienie, że sekwencje wklonowanych wstawek były sekwencjami fragmentów DNA odzwierciedlających otwartą ramę odczytu I i II genu I-18 C Chironomus tentans.
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1999, 39, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł
Tytuł:
Cloning of the DNA fragments reflecting the open reading frame I and II of the I-18 C gene of Chironomus tentans. VII. The preparation of the inserts and the translational vector - pET-3a for ligation
Autorzy:
Borowicz, B P
Powiązania:
https://bibliotekanauki.pl/articles/66798.pdf
Data publikacji:
1999
Wydawca:
Polska Akademia Nauk. Czytelnia Czasopism PAN
Tematy:
pET-3a vector
promoter system
cloning
I-18 C gene
T7 RNA polymerase
Chironomus tentans
polymerase chain reaction
expression
DNA fragment
Opis:
The technology applied for the cloning of the open reading frame (ORF) I and II reflecting DNA fragments in regard to the preparation of the inserts and the translational vector pET-3a for ligation, is described. The main steps of the preparation of the inserts include: digestion of the isolated recombinant bluescript plasmids, carrying the inserts, with the Nde I and Bam HI, purification and isolation of the inserts after the digestion, by the preparative agarose gel electrophoresis (2% gel, 1 x TAE buffer) and then by the centrifugation through the filtration device of the isolated DNA fragment from the gel and also estimation of the inserts concentration by the agarose gel electrophoresis (2% gel, 1 x TBE buffer). The main steps of the preparation of the pET-3a vector included: transformation of the competent E. coli cells of the XL-1 strain with the pET-3a, growing of the transformed bacteria on agar plates (with ampicillin) and then growing of the isolated transformed bacterial colonies in culture to finally isolate the plasmid, digestion of the plasmid with the Nde I and Bam HI, purification of the isolatcd plasmid, after the digestion, by the preparative agarose gel electrophoresis (0.8% gel, 1 x TAE buffer), centrifugation through the filtration device of the isolated DNA fragment from the gel, phenol extraction of the isolated plasmid, estimation of the concentration of the plasmid by the agarose gel electrophoresis (0.8% gel, 1 x TBE buffer).
Opisano technologię zastosowaną do klonowania fragmentów DNA odzwierciedlających otwartą ramę odczytu I i II w zakresie przygotowania wstawek i wektora translacyjnego - pET-3a do ligacji. Główne etapy przygotowania wstawek obejmowały: - trawienie Nde I i Bam HI, wyizolowanych rekombinacyjnych plazmidów blueskrypt, które zawierały wstawki, - oczyszczanie i izolację wstawek, po trawieniu przy użyciu preparatywnej elektroforezy w żelu agarozowym (2% żel, 1 x stężony bufor TAE) i następnie przez odwirowanie wyizolowanego fragmentu DNA z żelu, przy użyciu urządzenia filtracyjnego - oraz ocenę stężenia wstawek przy użyciu elektroforezy (2% żel, 1 x stężony bufor TBE). Główne etapy przygotowania wektora pET-3a obejmowały: transformację komórek kompetentnych E. coli szczepu XL-1, wektorem pET-3a, hodowlę stransformowanych komórek bakteryjnych na płytkach agarowych (z ampicyliną) i następnie hodowlę w kulturze wyizolowanych stransformowanych komórek bakteryjnych w celu izolacji plazmidu, trawienie wyizolowanego plazmidu Nde I i Bam HI oraz jego oczyszczenie po trawieniu, przy użyciu preparatywnej elektroforezy w żelu agarozowym (0.8% żel, 1 x stężony bufor TAE), odwirowanie wyodrębnionego z żelu fragmentu DNA przy zastosowaniu urządzenia filtracyjnego, ekstrakcję fenolową wyizolowanego plazmidu, ocenę stężenia plazmidu przy użyciu elektroforezy w żelu agarozowym (0.8% żel, 1 x stężony TBE).
Źródło:
Journal of Plant Protection Research; 1999, 39, 1
1427-4345
Pojawia się w:
Journal of Plant Protection Research
Dostawca treści:
Biblioteka Nauki
Artykuł

Ta witryna wykorzystuje pliki cookies do przechowywania informacji na Twoim komputerze. Pliki cookies stosujemy w celu świadczenia usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczane w Twoim komputerze. W każdym momencie możesz dokonać zmiany ustawień dotyczących cookies