- Tytuł:
-
Efektywność wykorzystania kolumn chromatograficznych typu „Poroshell” w badaniach białek gliadynowych metodą RP-HPLC
Efficiency of Poroshell type chromatogrphic columns for wheat gliadin separation using RP-HPLC - Autorzy:
-
Waga, Jacek
Zientarski, Jerzy
Szaleniec, Maciej
Skoczowski, Andrzej - Powiązania:
- https://bibliotekanauki.pl/articles/2198054.pdf
- Data publikacji:
- 2011-09-30
- Wydawca:
- Instytut Hodowli i Aklimatyzacji Roślin
- Tematy:
-
białka gliadynowe pszenicy
RP-HPLC
Poroshell
Zorbax C18
wheat gliadin proteins - Opis:
-
Wysokosprawna chromatografia cieczowa w odwróconej fazie (RP-HPLC) jest efektywną metodą analizy polimorficznych białek roślin uprawnych, w tym również białek zapasowych zbóż. Możliwość jej powszechnego wykorzystania w hodowli roślin ogranicza jednak znaczny koszt aparatury, wyposażenia i odczynników. W ostatnich latach opracowano nowy rodzaj kolumn chromatograficznych o złożach C18 osadzonych na powierzchniowo porowatej krzemionce (tzw. Fused-Core technology). Główną zaletą tych kolumn jest wysoki wzrost zdolności rozdzielczej (zwiększenie ilości tzw. półek teoretycznych), co daje możliwość znacznego skrócenia czasu, a tym samym obniżenia kosztów analizy. Celem badań było oszacowanie dokładności i efektywności rozdziału polimorficznych białek gliadynowych metodą RP-HPLC przy użyciu kolumn typu Fused-Core w porównaniu do kolumn C18 o klasycznych parametrach ziaren krzemionki. Materiał roślinny stanowiły linie mieszańcowe pszenicy ozimej różniące się pod względem alleli kontrolujących syntezę gliadyn. Analizowano pary blisko spokrewnionych linii mieszańcowych, z których jedna zawierała null allel natomiast druga stanowiła genotyp kontrolny. Porównywano także rozdziały mieszańców z ich komponentami rodzicielskimi. Punktem odniesienia dla oceny obrazów chromatograficznych kolumny typu Fused-Core — 300SB-C18 Poroshell były rozdziały uzyskane na tradycyjnej kolumnie SB300 Zorbax C18. Wyniki badań potwierdziły, iż analiza chromatograficzna gliadyn na kolumnie Poroshell jest metodą szybką i ekonomiczną. Wysokiej jakości obrazy rozdzielonych białek uzyskiwano już w czasie 8 minut. Jednakże krótki czas rozdziału obniżył ich rozdzielczość, jedną z najważniejszych zalet chromatografii RP-HPLC. Wyniki badań sugerują, iż kolumny typu Fused-Core mogą być przede wszystkim efektywnym narzędziem selekcji masowej natomiast tradycyjne kolumny, pozwalające identyfikować subtelne szczegóły obrazu chromato¬graficznego, mogą okazać się bardziej przydatne w badaniach genetycznych np. w analizie rozszczepienia genów kontrolujących syntezę białek prolaminowych.
RP-HPLC is an efficient tool for wheat storage proteins separation. Its extensive utilization in plant breeding is limited, however, by heavy expenses of apparatus, equipment and reagents. Recently a new type of chromatographic columns was introduced where stationary phase is based on the superficially porous silca (so called Fused-Core Particles). The main advantage of the Fused-Core stationary phase is a high increase of separation power (theoretical plates) which enables shortening of the separation time (up to few minutes) and consequently the reduction of the analysis costs. The aim of this study was a comparative evaluation of the accuracy and efficacy of the Fused-Core C18 column with a classic C18 column in the separation of wheat gliadins — one of the most complex and polymorphic plant proteins. Closely related winter wheat hybrid lines, differentiated in respect of gliadin controlling alleles, were analysed. Gentypes containing gliadin null alleles and corresponding control lines as well as parental forms and their progenies were compared using Fused-Core Poroshell 300SB-C18 and traditional Zorbax 300SB-C18 columns. The obtained results proved that RP-HPLC separation on the Poroshell column are indeed very fast and economical as the high quality chromatograms were obtained after 8 minutes of separation. However, their resolution was considerably lower as compared to the traditional column. In conclusion, the rapid PR-HPLC appears to be very well suited for mass selection of breeding materials, where large number of genotypes must be evaluated in a very short time period. However in a genetic research, where identification of discrete details of the chromatograms could be important for genotype classification, traditional columns seem to be more useful. - Źródło:
-
Biuletyn Instytutu Hodowli i Aklimatyzacji Roślin; 2011, 260/261; 5-20
0373-7837
2657-8913 - Pojawia się w:
- Biuletyn Instytutu Hodowli i Aklimatyzacji Roślin
- Dostawca treści:
- Biblioteka Nauki
Artykuł