- Tytuł:
-
Detection, isolation, and preliminary characterization of bacteria contaminating plant tissue cultures
Izolacja, wstępna charakterystyka i wykrywanie bakterii zanieczyszczających kultury roślinne in vitro - Autorzy:
-
Kaluzna, M.
Mikicinski, A.
Sobiczewski, P.
Zawadzka, M.
Zenkteler, E.
Orlikowska, T. - Powiązania:
- https://bibliotekanauki.pl/articles/27869.pdf
- Data publikacji:
- 2013
- Wydawca:
- Polskie Towarzystwo Botaniczne
- Opis:
-
In order to limit the contamination problem in plant
tissue cultures experiments on selection of media suitable for
detection and isolation of bacteria contaminating plant tissue
explants, and preliminary characterization of isolates were
made. In the first experiment aiming at detection of bacteria in
plant explants four strains representing genera most often occurring
at our survey of plant tissue cultures, and earlier isolated
and identified (Bacillus, Methylobacterium, Pseudomonas
and Xanthomonas) were streaked on five bacteriological media
(NA, King B, K, R2A and 523) and on the medium used for
plant culture initiation – 1 MS with milk albumin (IM). All strains
grew on all media but on K and IM at the slowest rate and on
523 medium at the fastest. The IM medium proved to be useful
for immediate bacteria detection at the initial stage of culture.
In the second experiment, aiming at characterization of isolates
on the basis of colony growth and morphology 14 strains
(Agrobacterium, Bacillus, Curtobacterium, Flavobacterium,
Lactobacillus, Methylobacterium – 2 strains Mycobacterium,
Paenibacillus, Plantibacterium, Pseudomonas, Stenotrophomonas,
Xanthomonas, and species Serratia marcescens) were
streaked on five microbiological media: KB, NBY, YDC, YNA
and YPGA. All strains grew on all those media but at different
rates. The only exception was the strain of Lactobacillus spp.,
which did not grow on King B medium. This medium allowed
the detection of such characteristic traits as fluorescence (Pseudomonas)
and secretion of inclusions (Stenotrophomonas). The
third experiment was focussed on assessment of the sensitivity
of detection of specific bacteria in pure cultures and in plant tissue
cultures using standard PCR and BIO-PCR techniques with
genus specific primers and 2 methods of DNA isolation. Results
showed that the use of Genomic Mini kit enabled an increase of
the sensitivity by 100 times as compared to extraction of DNA
by boiling. Moreover, the application of BIO-PCR increased
sensitivity of detection from 102 to 105 times over the standard
PCR. If looking for unknown cultivable bacteria more effective
detection seems to be use of microbiological method enabling
detection on bacteriological media single cells in the fragments
of explants or in wash liquids, in which fragmented explants
were shaken.
W pracy określono możliwość wykrywania obecności bakterii najczęściej spotykanych w kulturach roślinnych in vitro, należących do różnych rodzajów, przy pomocy technik mikrobiologicznej i molekularnej. Za najbardziej przydatną do izolacji uznano pożywkę 523 a także pożywkę zawierającą 1 soli mineralnych MS stosowaną do inicjacji kultur roślinnych, z dodatkiem 0,025% albuminy mlecznej. Większą czułość wykrywania bakterii przy pomocy markerowego DNA uzyskano przy zastosowaniu techniki polegającej na preinkubacji badanego materiału na pożywkach bakteriologicznych, a następnie na izolacji DNA ze wzrostu (BIO-PCR). Przy porównaniu sposobów izolacji DNA większą czułość uzyskano stosując zestaw Genomic Mini (A&A Biotechnology) niż po zastosowaniu ekstrakcji w temperaturze wrzenia. - Źródło:
-
Acta Agrobotanica; 2013, 66, 4
0065-0951
2300-357X - Pojawia się w:
- Acta Agrobotanica
- Dostawca treści:
- Biblioteka Nauki
Artykuł