- Tytuł:
-
Measurement of nitrate reductase activity in a field conditions – methodology
Pomiar aktywności reduktazy azotanowej w warunkach terenowych – metodyka - Autorzy:
-
Krywult, M
Bielec, D - Powiązania:
- https://bibliotekanauki.pl/articles/401830.pdf
- Data publikacji:
- 2013
- Wydawca:
- Polskie Towarzystwo Inżynierii Ekologicznej
- Tematy:
-
nitrate reductase
kinetic changes
field analysis methodology
optimization
reduktaza azotanowa
kinetyka reakcji
metodyka analiz terenowych
optymalizacja reakcji - Opis:
-
During recent three decades interest for biomonitoring and ecological studies was rapidly growing. Therefore was necessary develop of new methods of analysis biochemical parameters whose allow quantify biological response of investigated organisms for environmental factors. The main goal of this paper demonstrates optimal conditions for enzyme kinetics analysis conducted in the field in situ. Nitrate reductase activity is typically assayed in vivo by measuring nitrite production in tissue which has been vacuum infiltrated with buffered nitrate solution. For this study a nitrate reductase assay was adapted from a number of studies with own modifications of authors. Leaves of examined plants were collected on investigated plots and immediately placed into test tubes with buffer solution (potassium phosphate dibasic containing 0.6% propanol-1) and evacuated in 0.33 atm. for 10 minutes. Then known amount of potassium nitrate was added, and the solution sample was analyzed in order to obtain a background level of nitrite. The foliage samples were incubated for 2 hours at 20 °C in darkness. Follow this procedure have given the most optimal conditions for reaction stability. After incubation the amount of synthesized nitrite was determined colorimetrically using sulfanilamide and N-(1-naphthyl)ethylenediamine dihydrochloride, measured at 540 nm. The foliage samples were oven-dried to obtain their dry mass. Level of nitrate reductase activity was calculated as the amount of nitrite produced in nmol per gram of dry mass of foliage tissue per hour. The result obtained during these research demonstrate the changes of nitrate reductase dynamics according to change of incubation parameters. Dynamics of enzyme activity with changes of solution pH and incubation temperature was presented. Installation for conducting infiltration process and construction of incubation chamber is also described in this paper.
W ciągu ostatnich trzech dekad zainteresowanie biomonitoringiem i badaniami ekologicznymi szybko wzrastało. Dlatego zaistniała konieczność rozwoju nowych metod analiz parametrów biochemicznych, które pozwoliłyby określić biologiczna odpowiedź badanych organizmów na działanie czynników środowiskowych. Głównym celem artykułu jest przedstawienie optymalnych warunków dla analiz kinetyki reakcji enzymatycznych przeprowadzonych w warunkach terenowych. Aktywność reduktazy azotanowej jest zwykle badane in vivo poprzez pomiar produkcji azotynów w tkankach roślinnych, które zostały poddane infiltracji w buforowanym roztworze azotanów. Metodykę oparto o liczne opracowania badawcze oraz wprowadzone własne modyfikacje. Liście dębu zbierano na badanej powierzchni, natychmiast umieszczano w probówkach z roztworem buforowym (fosforan potasu z dodatkiem 0,6% propanolu-1) i poddawano działaniu podciśnienia 0,33 atm. przez 10 min. Następnie dodano znaną ilość azotanu potasu, po czym próbkę roztworu oznaczano dla określenia zerowego stężenia azotynów. Próbki liści inkubowano przez 2 godziny w 20 °C w ciemności. W ten sposób uzyskano warunki stabilności reakcji. Po zakończeniu inkubacji stężenie zsyntezowanego azotynu określono kolorymetrycznie przy użyciu sulfanidamidu oraz N-(1-naftylo)etylenodwuaminy x 2HCl przy długości fali 540 nm. Próbki liści suszono do uzyskania suchej masy. Poziom aktywności reduktazy azotanowej obliczono jako ilość zsyntezowanego azotynu [nmol] na gram suchej masy na godzinę. Uzyskane wyniki wskazują dynamikę zmian aktywności reduktazy odpowiednio do zmian warunków inkubacji. Przedstawiono dynamikę zmian aktywności enzymu w zależności od pH buforu i temperatury inkubacji. Zaprezentowano również instalację dla przeprowadzenia procesu infiltracji i inkubacji liści. - Źródło:
-
Inżynieria Ekologiczna; 2013, 32; 115-121
2081-139X
2392-0629 - Pojawia się w:
- Inżynieria Ekologiczna
- Dostawca treści:
- Biblioteka Nauki
Artykuł