Comparative analysis of different methodological approaches to the in vitro study of tumour cells chemosensitivity

Drug sensitivity assay was performed using two human tumour celi lines: HeLa and Hep-2 cultivated in two-dimensional monolayer celi cultures and three-dimensional cultures on gelatine sponge SpongostanK. Two cytostatics with different mechanisms of anti-tumour action were used: cisplatin and etoposide. Chemosensitivity of tumour cells was assessed by counting the number of viable and nonviable cells (cytostatic and cytotoxic activity of drugs), by counting the number of apoptotic cells and by clonogenic assay of viable cells. We found that the clonogenic assay was morę sensitive than the other tests used, especially after long-term (7 days) treatment of tumour cells with cytostatics. A short (24h) treatment with cytostatics gave false results which were not confirmed after prolonged treatment with cytostatics. We suppose that short treatment tests should not be used for examination of the chemosensitivity of tumour cells isolated from patients. Tumour cells growing on SpongostanH were viable for a longer time than in monolayer cultures and exhibited chemosensitivity comparable to monolayer celi cultures despite of their multilayer growth on gelatine sponge.

Do badań wrażliwości na cytostatyki użyto dwie ludzkie linie nowotworowe: HeLa i Hep-2, hodowane w formie murawy dwuwymiarowej (płaskiej) oraz w formie przestrzennej, trójwymiarowej, na gąbce żelatynowej Spongostan". W badaniach użyto cytostatyki posiadające różny mechanizm działania przeciwnowotworowego, a mianowicie cisplatynę i etopozyd. Wrażliwość komórek nowotworowych na chemioterapeutyki określano ilością komórek przeżywających i martwych (cytostatyczne i cytotoksyczne właściwości leków), ilością komórek apoptotycznych oraz oceniano klonogenne właściwości komórek przeżywających. Stwierdzono, że ocena klonogennych właściwości komórek jest metodą bardziej czułą w porównaniu z innymi testami, szczególnie po długim (7-dniowym) kontakcie komórek z cytostatykami. Ocena krótkotrwałego (24-godz.) kontaktu komórek nowotworowych z cytostatykami dawała fałszywe wyniki, nie potwierdzone po długotrwałej inkubacji komórek z cytostatykami. Uważamy, że testy polegające na ocenie efektu krótkotrwałej inkubacji komórek z lekami nie powinny być stosowane do oceny wrażliwości na chemioterapeutyki komórek nowotworowych izolowanych od pacjenta. Komórki nowotworowe rosnące na Spongostanie” były żywe dłużej niż rosnące w hodowlach płaskich i pomimo wielowarstwowego wzrostu na gąbce żelatynowej wykazywały wrażliwość na leki porównywalną z hodowlami płaskimi.