Indukowanie embriogenezy somatycznej w kulturach in vitro gatunków rodzaju Trifilium oraz analiza molekularna uzyskanych regenerantów pokolenia R1 z wykorzystaniem markerów RAPD

Indukcję somatycznej embriogenezy w rodzaju Trifolium przeprowadzono u 8 odmian pochodzących z trzech gatunków: Trifolium pratense - odmiany: 'Hruszowska', 'Nike', 'Dajana', 'Jubilatka', 'Ulka', 'Karo'; Trifolium resupinatum odmiana 'Ira' oraz Trifolium incarnatum odmiana 'Opolska'. Kalus indukowano na pożywce PHILLIPS, COLLINS [1979] z modyfikacjami wg RYBCZYŃSKIEGO [1991] zawierającej 2 mg·dm⁻³ 2,4-D, 0,1 mg·dm⁻³ BAP, 0,06 mg·dm⁻³ picloramu oraz 2 mg·dm⁻³ 2iP. Efektywność somatycznej embriogenezy oceniano na dwóch rodzajach eksplantatów: liścieniach i hypokotylach pobieranych z 5-6 dniowych sterylnych siewek. Namnażanie kalusa i formowanie się w nim zarodków przebiegało na pożywce różnicującej, zawierającej ten sam skład jak pożywka indukująca za wyjątkiem 2iP, który zastąpiono 0,2 mg·dm⁻³ zeatyny. Pasażowanie zarodków somatycznych na pożywkę regeneracyjną MURASHIGE, SKOOG [1962] przyspieszało ich rozwój i doprowadzało do wzrostu roślin. Embriogenny kalus uzyskano tylko u odmiany 'Opolska' z gatunku Trifolium incarnatum z obu rodzajów eksplantatów. Analiza molekularna wykonana techniką PCR z wykorzystaniem markerów RAPD wskazuje na niski stopień podobieństwa genetycznego pomiędzy odmianą wyjściową 'Opolska', a jej klonami uzyskanymi na drodze somatycznej embriogenezy.

Induction of somatic embryogenesis in Trifolium genus was been carried out on eight varieties from three species: Trifolium pretense ('Hruszowska', 'Nike', 'Dajana', 'Jubilatka', 'Ulka', 'Karo' cvs.); Trifolium resupinatum (cv. 'Ira') and Trifolium incarnatum (cv. 'Opolska'). The callus was obtained on PHILLIPS, COLLINS [1979] medium with modifications by Rybczyński [1991], Somatic embryogenesis was induced on two of explants: cotyledons and hypocotyls. The medium contained 2.0 mg·dm⁻³ 2,4-D, 0.1 mg·dm⁻³ BAP, 0.06 mg·dm⁻³ picloram and 2.0 mg·dm⁻³ 2iP. Proliferation of callus and formation of embryos were carried out on differentiating medium with composition the same as induction medium, except of 2iP, that was replaced by 0.2 mg·dm⁻³ zeatin. Transfer of somatic embryos on regeneration medium MURASHIGE, SKOOG [1962] accelerated their development and affected plant growth. Embryogenic callus was obtained only from 'Opolska' cv. of Trifolium incarnatum from both types of explants. Molecular analysis performed with PCR technique using RAPD markers, indicated low level of genetic similarity between 'Opolska' cultivar and clones obtained by somatic embryogenesis.