Obtaining and regeneration of Trichosporon cutaneum TrNU 18 protoplasts

Cell walls of Trichosporon cutaneum TrNU 18 may be digested by the lytic enzyme obtained from Trichoderma reesei MHC 22. The liberation of TrNU 18 protoplasts required preliminary treatment of cells with 2-mercaptoethanol, the use of 0.05 M Me Ilvaine buffer with pH of 4.5-5.0 cells of the logarithmic growth phase, and 0.8 M MgSO₄ as osmotic stabilizer. The obtained protoplasts regenerated in synthetic and natural media. The media with 0.8 M mannitol favoured the regeneration of TrNU 18 cell wall more than control media without this component.

Ściany komórkowe Trichosporon cutaneum wykazywały dużą odporność na działanie enzymów litycznych wytwarzanych przez szczepy Arthrobacter luteus, Streptomyces sp. i Trichoderma reesei (tab. 3, 5). Uwalnianie protoplastów najskuteczniej odbywało się w wyniku działania na ściany komórkowe tych drożdży kompleksu enzymatycznego otrzymanego ze szczepu Trichoderma reesei MHC 22, który miał zdolność hydrolizowania wiązań β-1,3-, β-1,4- i β-1,6-glukozydowych (tab. 4, 5). Zwiększoną ilość protoplastów Trichosporon cutaneum ok. 8,7·10⁶ /mg s.m. drożdży otrzymano po wstępnym traktowaniu komórek 2-merkaptoetanolem oraz po zastosowaniu: 0,05 M buforu Mc-Ilvaine'a o pH 4,5-5,0; 0,8 M MgSO₄ jako stabilizatora osmotycznego oraz komórek drożdży TrNU 18 z fazy wzrostu logarytmicznego o gęstości zawiesiny E₅₅₀ = 0,37 (tab. 6-10 i rys. 2, 4). Wielkość tworzonych protoplastów TrNU 18 miała wymiary od 6 do 13 μm. Protoplasty TrNU 18 regenerowały się w podłożach syntetycznych jak również w podłożach naturalnych. Ich stopień regeneracji zależał od rodzaju czynnika stabilizującego podłoże regeneracyjne. W obecności 0,8 M MgSO₄ regenerowało się od 19,5 do 34,1% protoplastów. W podłożach z mannitolem ściana komórkowa Trichosporon cutaneum TrNU 18 odtwarzała się łatwiej. Stopień zregenerowanych protoplastów wynosił 33,0-52,7% (tab. 11).