Use of RAPD-PCR and ITS markers for identification of Diaporthe/Phomopsis from fruit trees in South-Eastern Poland

In recent years, it has been reported the increasing harmfulness of Diaporthe/Phomopsis spp. in the orchards and nurseries worldwide. They cause nonspecific symptoms which in combination with the morphological similarity of the cultures and difficult sporulation creates problems with their correct identification using classical methods. This implies the need to integrate advanced molecular techniques to identify the strain on the species level. The aim of this research was to determine the identity and genetically characterize forty isolates of Diaporthe/Phomopsis obtained in 2010–2012 from the shoots of selected fruit trees grown in the south-eastern Poland. Using the RAPD-PCR technique the genetic similarity within studied population has been demonstrated irrespectively of the origin and type of the host plant from which the isolates derived. Based on the comparative analysis of the non-coding sequence of the ITS regions (ITS1, 5.8S rDNA, ITS2) with the sequences available in NCBI database the studied Diaporthe isolates were identified as Diaporthe eres species complex not described previously on fruit trees under Polish conditions.

W ostatnich latach zanotowano rosnącą szkodliwość grzybów z rodzaju Diaporthe/Phomopsis w sadach i szkółkach na całym świecie. Grzyby te powodują niespecyficzne objawy chorobowe, co w połączeniu z podobieństwem morfologicznym kultur i utrudnionym zarodnikowaniem stwarza duże problemy z ich poprawną identyfikacją metodami klasycznymi. Oznacza to potrzebę włączania zaawansowanych technik molekularnych do identyfikacji szczepu na poziomie gatunku. Celem przeprowadzonych badań była identyfikacja oraz zróżnicowanie genetyczne czterdziestu izolatów Diaporthe/Phomopsis wyizolowanych w latach 2010–2012 z pędów wybranych drzew owocowych uprawianych w południowo-wschodniej Polsce. Za pomocą techniki RAPD-PCR wykazano podobieństwo genetyczne uzyskanych izolatów niezależnie od miejsca izolacji oraz gatunku rośliny gospodarza. Za pomocą analizy porównawczej niekodujących sekwencji regionów ITS w obrębie genu rDNA (ITS1, 5.8S rDNA, ITS2) z sekwencjami dostępnymi w bazie danych NCBI zidentyfikowano badane izolaty jako jeden gatunek należący do kompleksu Diaporthe eres, nieopisany wcześniej na roślinach sadowniczych w warunkach naszego kraju.