Proteolytic activity of the viscera and partial purification of acid proteases of squid Illex argentinus hepatopancreas

The squid hepatopancreas, containing 20-60% lipids, is not suitable on board vessel for producing fodder meal and is often discarded, although it constitutes the major part of the viscera and is a rich source of proteolytic enzymes. The proteolytic activity against hemoglobin at pH 3.0 of the extract of the he pato pan ere a s of frozen stored squid, calculated per mg of protein, is about 20 times higher than that of the extract of the rest of the viscera. Due to incubation of the homogenate at pH 3.0 at 30 and 40°C in 2 days a clear watery phase was formed, well separated from the oily fraction containing floating solid particles of the autolysate. In 2 days about 35 and 50% of the protein was hydrolysed at 20°C and 30-40°C, respectively, to degradation products not precipitated by TCA. The proteolytic activity of the autolyzed homogenate after 2 days at pH 3.0 is about 80 % of that of the original homogenate. Incubation at 40°C at pH 3.0 decreased the activity after 6 days by about 50%. In the autolysate of squid hepatopancreas the proteolytic activity at pH 3.0 in the absence of reducing compounds was almost totally due to aspartic proteases. In the presence of dithiothreitol the activity increased by about 50%, but the increase was only partly due to the presence of thiol proteases.

Zbadano aktywność proteolityczną ekstraktów enzymów z wnętrzności mrożonych kalmarów Illex argentinus wobec hemoglobiny przy pH 3 oraz określono wpływ temperatury i czasu inkubacji na stabilność enzymów i autolizę białek homogenatu z wątrobo-trzustki. Proteolityczna aktywność przy pH 3 ekstraktu enzymów z wątrobo-trzustki kalmarów jest w przeliczeniu na 1 mg białek około 20 razy większa niż aktywność ekstraktów z pozostałych wnętrzności. Po dwóch dniach inkubacji homogenatu z wątrobo-trzustki w temperaturze 20°C i 30—40°C hydrolizuje odpowiednio około 35% i 50% białek. Proteolityczna aktywność w zautolizowanym homogenacie obniża się w tych warunkach o około 20%. Aktywność proteolityczna w autolizacie wykazywana przy pH 3 w nieobecności substancji redukujących pochodzi nieomal całkowicie od proteaz asparaginowych. Autoliza białek wątrobo-trzustki kalmarów jest prostą i tanią drogą uzyskiwania częściowo oczyszczonego preparatu enzymów proteolitycznych aktywnych w kwaśnym środowisku. Jednocześnie ułatwia ona oddzielenie lipidów i części stałych od klarownego autolizatu. Autolizat może stanowić półprodukt do otrzymywania preparatu enzymów proteolitycznych o większej czystości.