Improvement of Chrysanthemum × grandiflorum (Ramat.) Kitam. encapsulation-dehydration cryopreservation protocol

To optimize the protocol, the shoot tips of Chrysanthemum × grandiflorum (Ramat.) Kitam. radiomutants have been cryopreserved using the encapsulationdehydration technique, following different approaches. In the experiment the influence of abscisic acid – ABA (0; 10; 20 and 30 μM), sucrose concentration (0.09; 0.25 and 0.5 M) and temperature (5ºC or 22ºC) during preculture were tested. Furthermore two dehydration methods, gradual and one-step, were considered. Since the best results were reported with 10 μM ABA + 0.09 M sucrose at room temperature and gradual dehydration, only this combination was selected for the next desiccation-adjustment step. From the time of air desiccation under laminar air-flow applied (0; 1; 2; 3; 4 and 5 hours), 3 hours provided the best results. Due to the growth inhibition on the hormone-free medium, the addition of plant growth regulators during that phase was also tested, confirming the need to apply cytokinins into the medium.

W celu optymalizacji procedury pąki wierzchotkowe radiomutantów chryzantemy wielkokwiatowej pochodzące z różnych warunków kultury in vitro poddane zostały krioprezerwacji techniką kapsułkowania-dehydratacji. W trakcie doświadczenia zbadano wpływ kwasu abscysynowego – ABA (0; 10; 20 i 30 μM), stężenia sacharozy (0,09; 0,25 i 0,5 M) oraz temperatury (5ºC lub 22ºC) w trakcie prekultury. Uwzględnione zostały dwie metody dehydratacji (stopniowa i jednoetapowa). Ponieważ najlepsze wyniki uzyskano na pożywce zawierającej 10 μM ABA + 0,09 M sacharozy w temperaturze pokojowej i po zastosowaniu stopniowej dehydratacji, tylko tę kombinację wykorzystano w kolejnym etapie – optymalizacji czasu desykacji. Spośród zastosowanych okresów suszenia (0, 1, 2, 3, 4 i 5 godzin), suszenie przez 3 godziny zapewniło najlepsze wyniki. W związku z zahamowaniem wzrostu roślin na pożywce pozbawionej regulatorów wzrostu określono wpływ auksyn i cytokinin na ten proces, potwierdzając konieczność stosowania tych ostatnich.